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高效液相色谱柱常见问题分析与解决方案

更新时间:2018-05-26 13:59:51点击次数:229次字号:T|T
1.使用一段时间后柱压过高: 解决方案:首先查看是否HPLC系统原因,排除系统原因后,原因基本是由于实验过程中杂质在柱中的累积。尽量完善操作条件,做完样品后要及时冲洗干净,如缓冲盐的流动相一定要用高比例的水溶液(如,90%)冲洗完全后再用有机相保存。 2.筛板堵塞与柱头塌陷: 解决方法:如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染,可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力,或者卸下色谱柱头,小心取下筛板,用5%左右的硝酸溶...


1.使用一段时间后柱压过高:
解决方案:首先查看是否HPLC系统原因,排除系统原因后,原因基本是由于实验过程中杂质在柱中的累积。尽量完善操作条件,做完样品后要及时冲洗干净,如缓冲盐的流动相一定要用高比例的水溶液(如,90%)冲洗完全后再用有机相保存。

2.筛板堵塞与柱头塌陷:
解决方法:如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染,可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力,或者卸下色谱柱头,小心取下筛板,用5%左右的硝酸溶液超声处理20分钟左右,再用纯水超声20分钟左右,重新装入色谱柱。

3.色谱柱头的填料被样品污染:
解决方法:
如确定色谱柱头的填料被污染,将柱头螺丝卸下,挖出柱内前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔细修复后,重新安装上柱头螺丝。

4.色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂,形成结晶析出:
解决方法:
如确定是盐结晶,用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解,再换高浓度甲醇。

注意事项:
1.无论何时,必须保证色谱柱柱床不干涸,尤其是进样检测和柱冲洗过程中不能让流动相长时间(30min以上)走空,否则易使色谱柱干涸且带入大量几乎无法排出的气泡,甚至导致柱床局部塌陷或中部开裂。
2.使用与保存时,严禁用力甩,绝对杜绝不小心猛烈撞击或高处掉落,否则,易导致柱床机械性损坏,则再无再生可能。
3.当柱子和色谱仪联结时,阀件或管路一定要清洗干净;
4.避免使用高粘度的溶剂作为流动相;
5.进样样品要全溶解;
6.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围;
7.每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品;
8.每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱;

9.若分析柱长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭。

液相色谱仪检测中


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(编辑:奥普斯高效液相色谱仪)
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